सेल कल्चर दूषितता प्रभावीपणे कमी करण्यात आली

सेल कल्चर्सचे दूषित होणे सेल कल्चर प्रयोगशाळांमध्ये सहजपणे सर्वात सामान्य समस्या बनू शकते, कधीकधी खूप गंभीर परिणाम होऊ शकतात.सेल कल्चर दूषित पदार्थ दोन वर्गांमध्ये विभागले जाऊ शकतात, रासायनिक दूषित पदार्थ जसे की मध्यम, सीरम आणि पाण्यातील अशुद्धता, एंडोटॉक्सिन, प्लास्टिसायझर्स आणि डिटर्जंट्स आणि जीवाणू, मूस, यीस्ट, विषाणू, मायकोप्लाझ्मा क्रॉस इन्फेक्शन यासारखे जैविक दूषित पदार्थ.इतर सेल लाइन्स द्वारे दूषित.दूषितता पूर्णपणे काढून टाकणे अशक्य असले तरी, त्याची वारंवारता आणि तीव्रता त्याचे स्रोत पूर्णपणे समजून घेऊन आणि चांगल्या ऍसेप्टिक तंत्रांचे अनुसरण करून कमी करता येते.

1.हा विभाग मुख्य प्रकारच्या जैविक दूषिततेची रूपरेषा देतो:
जिवाणू दूषित होणे
मूस आणि व्हायरस दूषित
मायकोप्लाझ्मा दूषित होणे
यीस्ट दूषित होणे

1.1 जिवाणू दूषित होणे
बॅक्टेरिया हा सर्वव्यापी एकल-पेशी सूक्ष्मजीवांचा एक मोठा समूह आहे.ते सामान्यतः काही मायक्रॉन व्यासाचे असतात आणि गोलाकारांपासून रॉड्स आणि सर्पिलपर्यंत विविध आकारात येऊ शकतात.त्यांच्या सर्वव्यापीपणामुळे, आकारमानामुळे आणि जलद वाढीच्या दरामुळे, यीस्ट आणि मोल्ड्ससह जीवाणू हे सेल संस्कृतीतील सर्वात सामान्य जैविक दूषित घटक आहेत.

1.1.1 जीवाणूजन्य दूषिततेचा शोध
जिवाणूजन्य दूषितता संसर्ग झाल्यानंतर काही दिवसांत संस्कृतीच्या दृश्य तपासणीद्वारे सहजपणे शोधली जाते;
संक्रमित संस्कृती सहसा ढगाळ (म्हणजे, गढूळ), कधीकधी पृष्ठभागावर पातळ फिल्मसह दिसतात.
कल्चर माध्यमाच्या pH मध्ये अचानक थेंब देखील वारंवार येतात.
कमी-शक्तीच्या सूक्ष्मदर्शकाखाली, जीवाणू पेशींमध्ये लहान, हलणारे कणकेसारखे दिसतात आणि उच्च-शक्तीच्या सूक्ष्मदर्शकाखाली निरीक्षण केल्यास वैयक्तिक जीवाणूंच्या आकाराचे निराकरण होऊ शकते.

1.2 मोल्ड आणि व्हायरस दूषित होणे
१.२.१ साचा दूषित होणे
मोल्ड्स हे बुरशीजन्य साम्राज्याचे युकेरियोटिक सूक्ष्मजीव आहेत जे हायफे नावाच्या बहुकोशिकीय तंतुंच्या स्वरूपात वाढतात.या मल्टीसेल्युलर फिलामेंट्सच्या संयोजी नेटवर्कमध्ये आनुवंशिकदृष्ट्या एकसारखे केंद्रक असतात ज्याला कॉलनीज किंवा मायसेलियम म्हणतात.

यीस्टच्या दूषिततेप्रमाणेच, कल्चरचा pH दूषित होण्याच्या सुरुवातीच्या टप्प्यात स्थिर राहतो आणि नंतर संस्कृती अधिक गंभीरपणे संक्रमित झाल्याने आणि ढगाळ झाल्यामुळे वेगाने वाढते.सूक्ष्मदर्शकाखाली, मायसेलियम हे सहसा फिलामेंटस असते, कधीकधी बीजाणूंच्या दाट क्लस्टर्सच्या रूपात.पुष्कळ साच्यांचे बीजाणू त्यांच्या सुप्त अवस्थेमध्ये अत्यंत कठोर आणि आतिथ्य वातावरणात टिकून राहू शकतात आणि जेव्हा योग्य वाढीच्या परिस्थितीचा सामना केला जातो तेव्हाच ते सक्रिय होतात.

१.२.२ व्हायरस दूषित होणे
विषाणू हे सूक्ष्म संक्रामक घटक आहेत जे पुनरुत्पादनासाठी यजमान पेशींची यंत्रणा ताब्यात घेतात.त्यांच्या अत्यंत लहान आकारामुळे त्यांना कल्चरमध्ये शोधणे आणि सेल कल्चर प्रयोगशाळांमध्ये वापरल्या जाणार्‍या अभिकर्मकांमधून काढणे कठीण होते.बहुतेक विषाणूंना त्यांच्या यजमानांसाठी अत्यंत कठोर आवश्यकता असल्याने, ते सहसा यजमान व्यतिरिक्त इतर प्रजातींच्या पेशी संस्कृतींवर प्रतिकूल परिणाम करत नाहीत.
तथापि, विषाणू-संक्रमित सेल संस्कृतींचा वापर प्रयोगशाळेतील कर्मचार्‍यांच्या आरोग्यास गंभीर धोका निर्माण करू शकतो, विशेषत: जर प्रयोगशाळेत मानवी किंवा प्राइमेट पेशी वाढल्या असतील.

सेल कल्चर्समधील व्हायरल इन्फेक्शन इलेक्ट्रॉन मायक्रोस्कोपी, अँटीबॉडीजच्या संचासह इम्युनोस्टेनिंग, ELISA किंवा योग्य व्हायरल प्राइमर्ससह पीसीआरद्वारे शोधले जाऊ शकते.

१.३ मायकोप्लाझ्मा दूषित होणे
मायकोप्लाझ्मा हे सेल भिंती नसलेले साधे जीवाणू आहेत आणि ते सर्वात लहान स्वयं-प्रतिकृती करणारे जीव आहेत असे मानले जाते.त्यांच्या अत्यंत लहान आकारामुळे (सामान्यत: 1 मायक्रॉनपेक्षा कमी), मायकोप्लाझ्मा अत्यंत उच्च घनतेपर्यंत पोहोचत नाही तोपर्यंत ते शोधणे कठीण आहे आणि सेल कल्चर खराब होण्यास कारणीभूत आहे;तोपर्यंत, सहसा संसर्गाची कोणतीही स्पष्ट चिन्हे दिसत नाहीत.

1.3.1 मायकोप्लाझ्मा दूषिततेचा शोध
काही मंद गतीने वाढणारे मायकोप्लाझ्मा पेशींचा मृत्यू न होता संस्कृतींमध्ये टिकून राहू शकतात, परंतु ते संस्कृतींमध्ये यजमान पेशींचे वर्तन आणि चयापचय बदलतात.

क्रॉनिक मायकोप्लाझ्मा संसर्ग सेल प्रसार दर कमी करणे, संपृक्तता घनता कमी होणे आणि निलंबन संस्कृतीमध्ये एकत्रित होणे द्वारे दर्शविले जाऊ शकते.
तथापि, मायकोप्लाझ्मा दूषिततेचा शोध घेण्याचा एकमेव विश्वसनीय मार्ग म्हणजे फ्लोरोसेंट स्टेनिंग (उदा., Hoechst 33258), ELISA, PCR, इम्युनोस्टेनिंग, ऑटोरेडिओग्राफी किंवा सूक्ष्मजीव चाचणी वापरून संस्कृतीची नियमितपणे चाचणी करणे.

1.4 यीस्ट दूषित होणे
यीस्ट हे बुरशीजन्य साम्राज्याचे एकल-पेशी युकेरियोट्स आहेत, ज्याचा आकार काही मायक्रॉन (सहसा) ते 40 मायक्रॉन (क्वचितच) पर्यंत असतो.

1.4.1 यीस्ट दूषिततेचा शोध
बॅक्टेरियाच्या दूषिततेप्रमाणे, यीस्टने दूषित झालेल्या संस्कृती ढगाळ होऊ शकतात, विशेषत: जर प्रदूषण प्रगत अवस्थेत असेल.दूषित होण्यापर्यंत यीस्टने दूषित झालेल्या संस्कृतींचा पीएच फारच कमी होतो, जोपर्यंत दूषित होत नाही, ज्या टप्प्यावर पीएच सामान्यतः वाढतो.सूक्ष्मदर्शकाखाली, यीस्ट वैयक्तिक अंडाकृती किंवा गोलाकार कण म्हणून दिसते आणि लहान कण तयार करू शकतात.

2.क्रॉस इन्फेक्शन
जरी मायक्रोबियल दूषित होणे तितके सामान्य नसले तरी, HeLa आणि इतर वेगाने वाढणार्‍या सेल लाइन्ससह अनेक सेल लाइन्सचे व्यापक क्रॉस-दूषित होणे ही गंभीर परिणामांसह स्पष्टपणे परिभाषित समस्या आहे.प्रतिष्ठित सेल बँकांकडून सेल लाइन मिळवा, नियमितपणे सेल लाइन्सची वैशिष्ट्ये तपासा आणि चांगल्या ऍसेप्टिक तंत्रांचा वापर करा.या पद्धती तुम्हाला क्रॉस-दूषित होणे टाळण्यास मदत करतील.डीएनए फिंगरप्रिंटिंग, कॅरिओटाइपिंग आणि आयसोटायपिंग आपल्या सेल कल्चरमध्ये क्रॉस-दूषित आहे की नाही याची पुष्टी करू शकते.

जरी मायक्रोबियल दूषित होणे तितके सामान्य नसले तरी, HeLa आणि इतर वेगाने वाढणार्‍या सेल लाइन्ससह अनेक सेल लाइन्सचे व्यापक क्रॉस-दूषित होणे ही गंभीर परिणामांसह स्पष्टपणे परिभाषित समस्या आहे.प्रतिष्ठित सेल बँकांकडून सेल लाईन्स मिळवा, नियमितपणे सेल लाइन्सची वैशिष्ट्ये तपासा आणि चांगल्या ऍसेप्टिक तंत्रांचा वापर करा.या पद्धती तुम्हाला क्रॉस-दूषित होणे टाळण्यास मदत करतील.डीएनए फिंगरप्रिंटिंग, कॅरिओटाइपिंग आणि आयसोटायपिंग आपल्या सेल कल्चरमध्ये क्रॉस-दूषित आहे की नाही याची पुष्टी करू शकते.