सेल कल्चर वातावरणाचा सेल उत्पादनावर परिणाम होतो

सेल कल्चरचा एक मुख्य फायदा म्हणजे सेल पुनरुत्पादनाची भौतिक रसायनशास्त्र (म्हणजे तापमान, pH, ऑस्मोटिक प्रेशर, O2 आणि CO2 तणाव) आणि शारीरिक वातावरण (म्हणजे हार्मोन आणि पोषक घटकांची एकाग्रता) हाताळण्याची क्षमता.तापमानाव्यतिरिक्त, संस्कृतीचे वातावरण वाढीच्या माध्यमाद्वारे नियंत्रित केले जाते.

जरी संस्कृतीचे शारीरिक वातावरण त्याच्या भौतिक आणि रासायनिक वातावरणासारखे स्पष्ट नसले तरी सीरम घटकांची चांगली समज, प्रसारासाठी आवश्यक वाढीच्या घटकांची ओळख आणि संस्कृतीतील पेशींच्या सूक्ष्म वातावरणाची चांगली समज.(म्हणजे सेल-सेल परस्परसंवाद, वायू प्रसार, मॅट्रिक्ससह परस्परसंवाद) आता सीरम-मुक्त माध्यमामध्ये विशिष्ट सेल लाईन्स संवर्धित करण्यास अनुमती देतात.

1.संस्कृती वातावरणाचा पेशींच्या वाढीवर परिणाम होतो
कृपया लक्षात घ्या की सेल कल्चर अटी प्रत्येक सेल प्रकारासाठी भिन्न आहेत.
विशिष्ट सेल प्रकारासाठी आवश्यक असलेल्या संस्कृतीच्या परिस्थितीपासून विचलित होण्याचे परिणाम असामान्य फेनोटाइपच्या अभिव्यक्तीपासून सेल संस्कृतीच्या पूर्ण अपयशापर्यंत असतात.म्हणून, आम्ही शिफारस करतो की तुम्हाला स्वारस्य असलेल्या सेल लाइनशी परिचित व्हा आणि तुम्ही तुमच्या प्रयोगात वापरत असलेल्या प्रत्येक उत्पादनासाठी दिलेल्या सूचनांचे काटेकोरपणे पालन करा.

2.तुमच्या पेशींसाठी ऑप्टिमाइझ सेल कल्चर वातावरण तयार करण्यासाठी खबरदारी:
कल्चर मीडिया आणि सीरम (अधिक माहितीसाठी खाली पहा)
pH आणि CO2 पातळी (अधिक माहितीसाठी खाली पहा)
प्लास्टिकची लागवड करा (अधिक माहितीसाठी खाली पहा)
तापमान (अधिक माहितीसाठी खाली पहा)

2.1 सांस्कृतिक माध्यम आणि सीरम
संस्कृतीचे माध्यम हे संस्कृतीच्या वातावरणाचा सर्वात महत्त्वाचा भाग आहे, कारण ते पेशींच्या वाढीसाठी आवश्यक पोषक, वाढीचे घटक आणि संप्रेरक प्रदान करते आणि संस्कृतीचे पीएच आणि ऑस्मोटिक दाब नियंत्रित करते.

जरी प्रारंभिक सेल कल्चर प्रयोग ऊतींचे अर्क आणि शरीरातील द्रवपदार्थांपासून मिळवलेल्या नैसर्गिक माध्यमांचा वापर करून केले गेले असले तरी, मानकीकरणाची गरज, माध्यम गुणवत्ता आणि वाढती मागणी यामुळे निश्चित माध्यमांचा विकास झाला.मीडियाचे तीन मूलभूत प्रकार म्हणजे बेसल मीडिया, कमी केलेले सीरम मीडिया आणि सीरम-फ्री मीडिया आणि सीरम पूरकतेसाठी त्यांच्या वेगवेगळ्या आवश्यकता आहेत.

2.1.1 मूलभूत माध्यम
गिबको सेल कल्चर माध्यम
अमीनो ऍसिड, जीवनसत्त्वे, अजैविक क्षार आणि कार्बन स्रोत (जसे की ग्लुकोज) असलेल्या मूलभूत माध्यमांमध्ये बहुतेक सेल लाइन्स चांगल्या प्रकारे वाढतात, परंतु या मूलभूत माध्यमांच्या फॉर्म्युलेशनला सीरमसह पूरक असणे आवश्यक आहे.

2.1.2 कमी केलेले सीरम माध्यम
गिबको लो सीरम मिडीयम असलेली बाटली
सेल कल्चर प्रयोगांमध्ये सीरमचे प्रतिकूल परिणाम कमी करण्यासाठी आणखी एक धोरण म्हणजे सीरम-कमी माध्यम वापरणे.रिड्युस्ड सीरम मिडीयम हे पोषक आणि प्राण्यांपासून मिळणाऱ्या घटकांनी समृद्ध असलेले मूलभूत माध्यम सूत्र आहे, जे आवश्यक सीरमचे प्रमाण कमी करू शकते.

2.1.3 सीरम-मुक्त माध्यम
गिबको सीरम-मुक्त माध्यम असलेली बाटली
सीरम-मुक्त माध्यम (SFM) योग्य पोषण आणि संप्रेरक फॉर्म्युलेशनसह सीरम बदलून प्राणी सीरमच्या वापरास प्रतिबंध करते.अनेक प्राथमिक संस्कृती आणि सेल लाइन्समध्ये सीरम-मुक्त मध्यम फॉर्म्युलेशन आहेत, ज्यामध्ये चायनीज हॅम्स्टर ओव्हरी (सीएचओ) रीकॉम्बीनंट प्रोटीन उत्पादन लाइन, विविध हायब्रिडोमा सेल लाइन्स, कीटक रेषा Sf9 आणि Sf21 (स्पोडोप्टेरा फ्रुगीपर्डा), तसेच व्हायरस उत्पादनासाठी होस्टसाठी आहेत. (उदाहरणार्थ, 293, VERO, MDCK, MDBK), इ. सीरम-मुक्त माध्यम वापरण्याचा एक मुख्य फायदा म्हणजे वाढीच्या घटकांचे योग्य संयोजन निवडून विशिष्ट पेशी प्रकारांसाठी मध्यम निवडक बनवण्याची क्षमता.खालील तक्त्यामध्ये सीरम-मुक्त माध्यमाचे फायदे आणि तोटे सूचीबद्ध आहेत.

फायदा
स्पष्टता वाढवा
अधिक सातत्यपूर्ण कामगिरी
सुलभ शुद्धीकरण आणि डाउनस्ट्रीम प्रक्रिया
सेल फंक्शनचे अचूक मूल्यांकन करा
उत्पादकता वाढवा
शारीरिक प्रतिक्रियांचे उत्तम नियंत्रण
वर्धित सेल मीडिया शोध
गैरसोय
सेल प्रकार विशिष्ट मध्यम सूत्र आवश्यकता
उच्च अभिकर्मक शुद्धता आवश्यक आहे
वाढ मंदावली

2.2.1 pH पातळी
बहुतेक सामान्य सस्तन प्राण्यांच्या सेल लाईन्स पीएच 7.4 वर चांगल्या प्रकारे वाढतात आणि वेगवेगळ्या सेल लाईन्समधील फरक लहान असतो.तथापि, काही बदललेल्या पेशी रेषा किंचित अम्लीय वातावरणात (pH 7.0 – 7.4) चांगल्या प्रकारे वाढतात असे दिसून आले आहे, तर काही सामान्य फायब्रोब्लास्ट सेल रेषा किंचित अल्कधर्मी वातावरण (pH 7.4 – 7.7) पसंत करतात.Sf9 आणि Sf21 सारख्या कीटक सेल लाईन्स pH 6.2 वर उत्तम वाढतात.

2.2.2 CO2 पातळी
वाढीचे माध्यम संस्कृतीचे पीएच नियंत्रित करते आणि पीएचमधील बदलांना प्रतिकार करण्यासाठी संस्कृतीतील पेशींना बफर करते.सामान्यतः, हे बफरिंग सेंद्रिय (उदाहरणार्थ, HEPES) किंवा CO2-बायकार्बोनेट-आधारित बफर समाविष्ट करून प्राप्त केले जाते.माध्यमाचा pH विरघळलेल्या कार्बन डायऑक्साइड (CO2) आणि बायकार्बोनेट (HCO3-) च्या नाजूक समतोलावर अवलंबून असल्यामुळे, वातावरणातील CO2 मधील बदल या माध्यमाचा pH बदलतील.म्हणून, CO2-बायकार्बोनेट-आधारित बफरसह मध्यम बफर वापरताना, बाह्य CO2 वापरणे आवश्यक आहे, विशेषत: ओपन कल्चर डिशमध्ये पेशींचे संवर्धन करताना किंवा उच्च एकाग्रतेमध्ये बदललेल्या सेल लाइन्सचे संवर्धन करताना.जरी बहुतेक संशोधक सामान्यत: हवेत 5-7% CO2 वापरतात, बहुतेक सेल कल्चर प्रयोग सहसा 4-10% CO2 वापरतात.तथापि, योग्य पीएच आणि ऑस्मोटिक दाब प्राप्त करण्यासाठी प्रत्येक माध्यमामध्ये शिफारस केलेले CO2 ताण आणि बायकार्बोनेट एकाग्रता असते;अधिक माहितीसाठी, कृपया मध्यम उत्पादकाच्या सूचना पहा.

2.3 प्लास्टिकची लागवड करणे
सेल कल्चर प्लॅस्टिक विविध सेल कल्चर ऍप्लिकेशन्ससाठी विविध स्वरूपात, आकार आणि पृष्ठभागांमध्ये उपलब्ध आहे.तुमच्या सेल कल्चर ऍप्लिकेशनसाठी तुम्हाला योग्य प्लास्टिक निवडण्यात मदत करण्यासाठी खालील सेल कल्चर प्लास्टिक पृष्ठभाग मार्गदर्शक आणि सेल कल्चर कंटेनर मार्गदर्शक वापरा.
सर्व थर्मो सायंटिफिक नन्स सेल कल्चर प्लास्टिक पहा (जाहिरात लिंक)

2.4 तापमान
पेशी संवर्धनासाठी इष्टतम तापमान यजमानाच्या शरीराच्या तपमानावर मोठ्या प्रमाणात अवलंबून असते ज्यातून पेशी वेगळ्या केल्या जातात आणि तापमानातील शारीरिक बदलांवर (उदाहरणार्थ, त्वचेचे तापमान कंकाल स्नायूंपेक्षा कमी असू शकते. ).सेल कल्चरसाठी, ओव्हरहाटिंग ही ओव्हरहाटिंगपेक्षा अधिक गंभीर समस्या आहे.म्हणून, इनक्यूबेटरमधील तापमान सामान्यतः इष्टतम तापमानापेक्षा किंचित खाली सेट केले जाते.

2.4.1 विविध सेल लाईन्ससाठी इष्टतम तापमान
चांगल्या वाढीसाठी बहुतेक मानवी आणि सस्तन प्राण्यांच्या पेशी 36°C ते 37°C तापमानात ठेवल्या जातात.
इष्टतम वाढीसाठी कीटक पेशींची लागवड 27 डिग्री सेल्सिअस तापमानात केली जाते;ते कमी तापमानात आणि 27°C आणि 30°C दरम्यान अधिक हळूहळू वाढतात.३० डिग्री सेल्सिअसच्या वर, कीटक पेशींची चैतन्यशक्ती कमी होते, जरी ते २७ डिग्री सेल्सिअसपर्यंत परत आले तरी पेशी पुन्हा सावरणार नाहीत.
एव्हीयन सेल लाइन्सना जास्तीत जास्त वाढ होण्यासाठी 38.5°C आवश्यक असते.जरी या पेशी 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात ठेवल्या जाऊ शकतात, तरीही त्यांची वाढ हळूहळू होईल.
थंड रक्ताच्या प्राण्यांपासून (जसे की उभयचर, थंड पाण्याचे मासे) प्राप्त झालेल्या पेशी रेषा 15°C ते 26°C या विस्तृत तापमानाची श्रेणी सहन करू शकतात.